实验室里,使用高数值孔径(高放大率)物镜时效果最高,而使用低数值孔径物镜时效果几乎不明显
盖玻片有各种尺寸,下表总结了可用厚度:
序号 | 厚度(mm) |
---|---|
#0 | 0.08 – 0.13 |
#1 | 0.13 – 0.16 |
#1.5 | 0.16 – 0.19 |
#2 | 0.19 – 0.25 |
#3 | 0.25 – 0.35 |
#4 | 0.43 – 0.64 |
大多数显微镜物镜上刻有最佳的盖玻片厚度。对于大多数物镜,是0.17毫米。
正确的盖玻片厚度对于给定物镜的最佳分辨率非常重要。但不要去买更贵的0.17mm盖玻片,要买更薄、更便宜的(将在下面解释)。
一般来说,物镜的数值孔径越大,如果使用了错误的盖玻片厚度,分辨率损失就越严重。对于一些大口径物镜,只有几微米厚的盖玻片可以显著降低分辨率。因此,一些更高级的物镜有一个校正环。这是一个调整环,可以转动它来调整物镜,使其符合正在使用的实际盖玻片厚度。
许多物镜的最佳盖玻片厚度为0.17mm。现在,为什么最常见的盖玻片是#1(0.13-0.16mm),比计算出的最佳值还要薄?
答案有点复杂:盖玻片的厚度不是唯一重要的参数。
试样嵌入封片中。这种封片的厚度必须加到玻璃罩的厚度上。位于封片深处的试样比位于盖玻片正下方的试样具有更大的“有效”盖玻片厚度。
因此,计算出的(理想)盖玻片厚度为0.17mm是一个很好的折衷方案,即使“真正的”盖玻片更薄。
另外,封片的折射率也起作用。
用于非关键常规观测的廉价盖玻片将显示不同厚度的统计分布。也有各种各样的盖玻片,显示出更窄的厚度分布。有些人买便宜的盖玻片,然后用卡尺手动测量其厚度来分类。
值得这样吗?当使用低数值孔径的低倍物镜时,盖玻片厚度的差异甚至可能不明显,而且更昂贵的预选盖玻片可能仅在需要高分辨率且物镜不具有校正环的特定应用中才有必要。
BTW,封片的厚度和折射率也会对分辨率产生影响,封片的厚度可能更难标准化。